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北虫草液体菌种制作方法 北虫草菌种

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蛹虫草菌种(蛹虫草液体菌种的制备方法)
蛹虫草液体菌种的制备方法
一、培养基配方
配方为:玉米粉1%，葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%，水95.35%，硫酸镁0.05%，维生素B1 10mg，PH值调至6.5左右 。
二、生产和栽培方法
1.制作一级摇瓶:将这些原料溶于水中，放入500ml三角瓶中，每个三角瓶200ml，放入3颗左右玻璃珠，塞上棉塞，然后用4层纱布覆盖棉塞，将瓶口扎紧，放入高压灭菌器中消毒 。当压力表升至0.5kg/cm2时，清洁空气，然后关闭放气阀，直到温度计指针降至0 。
2.接种方法:首先将灭菌后的蛹虫草液体培养基放在超净工作台上，将蛹虫草母种和接种挂钩、酒精灯、酒精棉球等接种物品放在超净工作台上，将工作服挂在接种室进行消毒 。然后点燃接种室的气雾剂(最好用臭氧消毒器)，立即关闭所有门窗进行密闭消毒，打开紫外线灯 。40分钟后，烟雾散去，紫外线灯关闭，接种人员可以接种疫苗 。接种方法是穿上工作服，打开洁净工作台风扇，打开酒精灯，左手握住母管对准火焰口，右手握住铁钩，立即放入母管3-5秒，然后将菌种分成5-7段，再用左手迅速打开纱布瓶盖，并立即用右手将一段菌钩入瓶中(每瓶插入5-6片0.5平方厘米的菌种)，并迅速按原样盖上瓶盖 。
蛹虫草菌种接入后，移入22-24℃的恒温培养室，在摇床上摇床培养菌种 。摇床的转速为140转/分钟 。经过4-6天的产卵培养，蛹虫草液体颜色清晰，菌球密集，瓶口有蛹虫草的气味，可以判断该菌株为优良菌株 。如果发现瓶内细菌浓度低，气味难闻，有五颜六色的菌液，则为杂菌污染，一定不能使用 。
3.制作二级摇瓶:培养基为同一级别，蛹虫草液体菌种2000毫升装于5000毫升三角瓶中，灭菌冷却后，一级摇瓶按10%无菌操作放入大摇瓶中，在22-24℃、140转/分钟下振荡培养72小时后，菌球大小均匀，密度在80%以上，菌液清澈，气味芳香，无污染，合格 。由于5000ml的烧瓶体积较大，放不进便携式高压锅，用大锅太浪费 。为解决烧瓶灭菌问题，华山食用菌研究所研制了一台100升立式电加热自控高压灭菌器，一次可杀灭4个5000只烧瓶 。同时开发了一个可以一次摇动5-7个5000ml长颈瓶的摇床，轻便、无噪音、能耗低 。
4.菌种稀释:制备好的虫草液体菌种需要在接种前进行稀释，以扩大接种规模 。根据接种平板数，稀释倍数为5-8倍 。使用稀释槽稀释时，请遵循液体槽空的操作程序进行消除和合并:
(一)发酵罐空灭菌
发酵罐空消毒(内胆、过滤器、管道的消毒)是对发酵罐进行设备消毒灭菌的过程 。对于一周未使用的发酵罐或空压机(气泵)因停电停止运行的发酵罐，需要进行发酵罐空消毒 。具体操作方法是:
(1)关闭发酵罐，除夹套排气阀外的所有阀门，并拧紧发酵罐口的盖子 。(2)启动电源，打开控制柜的“杀菌”键，进入杀菌状态 。
(3)当温度升至100℃时，当夹套中有蒸汽冒出时，关闭夹套排气阀 。此时，增加夹套的温度和压力 。当夹套压力达到0.05Mpa以上时，缓慢打开夹套入口过滤器阀和过滤器尾阀 。
(4)当过滤器的冷凝水排出并有蒸汽冒出时，微开过滤器的尾阀，缓慢打开入口阀的尾阀，排出空气体管道中的冷凝水 。冷凝水排出后，慢慢打开进水阀，让蒸汽慢慢进入罐内 。
(5)微开发酵罐排气阀，缓慢排出发酵罐内的冷空气体，在空消除的全过程中控制发酵罐排气阀，使少量蒸汽流过发酵罐排气阀 。
(6)当控制柜内温度接近123℃，发酵罐内压力接近0.12Mpa时，缓慢打开接种管道末端，待接种管道内冷凝水排出后，确保末端有少量蒸汽冒出，以保证蒸汽循环 。
(7)当温度达到123℃，发酵罐压力达到0.12Mpa时，控制柜开始倒计时，屏幕上显示温度和倒计时时间 。当倒计时时间为0时，控制柜会自动报警，并且空会结束 。
(8)空灭菌结束后，关闭发酵罐加热棒、夹套过滤阀、发酵罐进气阀、发酵罐接种阀、接种管道末端阀门 。打开微型发酵罐排气阀、夹套排气阀和发酵罐入口阀尾阀，使夹套和发酵罐的压力缓慢降低 。当过滤器压力即将排出时，打开空压机(气泵)使空空气流过过滤器，通过过滤器的空空气在发酵罐的进气阀尾阀处排出，流经过滤器 。
(b)发酵罐的固体消除
(1)定量加入新鲜水后，打开夹套排气阀和发酵罐排气阀，启动电源，按“灭菌”键，进入灭菌状态 。
(2)当温度升至100℃时，关闭夹套排气阀，微开发酵罐排气阀 。在整个发酵罐过程中控制发酵罐排气阀的开度，以保证发酵罐内的冷空气体完全排出，蒸汽流动 。
(3)当控制柜显示屏显示温度为123℃，压力表压力为0.12 Mpa时，控制柜会自动倒计时，屏幕上可以显示发酵罐的温度和倒计时时间 。当倒计时时间为0时，控制柜会自动报警，打开夹套排气阀和发酵罐排气阀，使夹套和发酵罐压力缓慢下降(发酵罐压力不能降到零) 。这时，发酵罐的灭菌就完成了 。
注意:在计时开始和灭菌结束时，需要对发酵罐进行排水，微开接种阀，只能排出少量气体和水，每次排水时间为3-5min 。排水的目的是在阀门处排出原水；二是对阀门管道进行消毒 。
加入定量清水123℃灭菌40分钟，冷却至20℃，用空压机保持正压，用无菌操作法倒入摇瓶中，用无菌空气体搅拌均匀，将罐内压力升至0.5mpa进行接种(操作同液体接种)，接种量为50-60ml 。接种后，在18-21℃的暗处培养，用好的菌种覆盖材料表面7-10天 。
(4)相关设备:为了实现蛹虫草的周年工厂化生产，淄博华山食用菌研究所开发了一整套工厂化生产工艺及配套设备，主要简述如下:
(1)红外线定位定量自动装盘机，自动定量送料送水，省力高效；
②5-50立方米蒸压釜，煤、电、柴、自燃等型号；
③百级无菌净化接种线，保证接种成功率高；
【北虫草液体菌种制作方法 北虫草菌种】④不锈钢电热自控液体菌种发酵罐可用作稀释罐或发酵培养 。(摘自山东淄博华山食用菌研究所)

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